فایل مارکت

پايان نامه زراعت

روش هاي سترون سازي :

اهميت موضوع رعايت شرايط استريل در طي انجام کشت بافت هاي گياهي به قدري واضح است که تاکيد بر آن توضيح واضحات است.

با رعايت چند مورد احتياطي ساده مي توان ضمن جلوگيري از آلودگي ميکروبي محيط از هدر رفتن اوقات پر ارزش مصرف شده در آزمايشگاه به منظور تکرار کشت هاي آلوده شده ممانعت به عمل آورد.

در انتخاب محل اتاق کار سترون مهم ترين موضوع منحصر به فردي که بايد دقيقا مورد توجه قرار گرفته شده باشد جلوگيري از جريان يافتن هواي معمولي بر روي محل کار استريل شده مي باشد , زيرا جريان هوا با انتقال دادن اسپورها و ارگانيسم هاي آلوده کننده به اتاق کار سبب ايجاد آلودگي در کشتها مي شود. اختصاص دادن يک اتاق کوچک اندروني, اتاقي شبيه تاريکخانه عکاسي, به عنوان اتاق کار سترون شده روش بسيار مطلوبي است.

در اين قبيل اتاقکها معمولا به منظور انهدام اجرام ميکروبي موجود در هوا و سترون کردن سطوح داخلي اتاقک لامپ ميکروب کش توليد کننده اشعه ماورا بنفش نصب مي شود. اشعه اين لامپ ها (که طول موج آن 253.7 نانومتر است) اجرام ميکروبي را به آهستگي منهدم مي کند, ولي بدليل عدم نفوذ تشعشعات اين لامپ ها به قسمت هاي عمقي و قسمت هاي گرد گرفته و سايه گير اتاقک کار اجرام ميکروبي اين قسمتها از گزند اين اشعه مصون مي مانند. بهمين دليل اگر چه استعمال اين لامپ در اتاقک هاي کار کاملا مرسوم است, ولي تاثير قطعي آن در ايجاد محيط کاملا عاري از ميکروب مورد شک و ترديد مي باشد (18, و 11). عمر لامپ هاي ما وراء بنفش نسبتا کوتاه است . البته پس از متوقف شدن تولي اشعه ما وراء بنفش در طول موج 253.7 نانومتر اين لامپ ها براي مدتي به توليد نور مرئي ادامه مي دهند. در صورت وجود ابزار پلاستيکي در اتاقک کار از روشن کردن لامپ اشعه ما وراء بنفش خودداري نمود. ضمنا ادعا شده است که اين لامپ ها ممکن است باعث توليد شدن مواد بازدارنده رشد در مديوم کشت شوند. خلاصه اينکه استفاده از اين گونه لامپ هاي ميکروب کش بايد بحداقل ممکن کاهش داده شده و نبايد بسهولت جايگزين ساير روشهاي سترون سازي شوند. کابينت هاي روميزي مجهز به جريان هواي سترون شده بنحوي طراحي شده اند که در آنها جريان ملايمي از هواي الترافيلتره و سترون شده بطور مداوم از روي ميز کار عبور داده مي شود تا ميزان تماس هواي معمولي آلوده به اجرام ميکروبي با مواد و ابزار کشت بحداقل مقدار ممکن کاهش داده شود. به هنگام روشن کردن چراغ الکلي در داخل اين قبيل کابينت ها بايد موارد احتياط رعايت شوند, زيرا که الکل به شدت آتش گير است و جريان هواي داخل کابينت ممکن است شعله هاي آتش را به سمت محقق هدايت کند. ضمنا در حين انجام کشت پس از فرو برده شدن ابزار کار به داخل شيشه محتوي الکل اتانول يا الکل ايزوپروپانول 80 درجه ابتدا بايد با استفاده از کاغذ صافي استريل الکل اضافي آنها گرفته شده و سپس آنها برروي شعله چراغ الکلي گرفته شوند. قبل از شروع عمليات سترون نياز ميز کار بايد با حوله کاغذي آغشته به الکل اتانول و يا الکل ايزوپروپانول 80 درجه ضدعفوني شود. يکي ديگر از مسائل مبتلا به فعاليت هاي سترون نياز و عمده ترين منبع آلودگي کشتها کثيف بودن دستهاي محقق است. براي انجام دادن عمليات سترون نياز شستشوي معمولي دستها با آب کافي نيست , بلکه ضروري است دستها تا آرنج بشدت و به مدت چندين دقيقه با آب گرم فراوان و صابون شستشو داده شوند. دستها را پس از شستشو و خشک کردن بايد با محلول خيلي رقيق الکل اتانول يا الکل ايزوپروپانول ضدعفوني نمود.

به منظور سترون سازي ظروف شيشه اي مورد مصرف, ابزار کار, محلولهاي غذايي, و مواد گياهي مي توان از روشهاي متعددي مانند: حرارت خشک, حرارت مرطوب (بخار داغ), الترافيلتراسيون, و سترون سازي شيميايي استفاده نمود.

روش حرارت خشک (آون) Dry heat     :

اين روش براي ضدعفوني کردن ظروف شيشه اي, ابزار فلزي, و ساير وسايل و موادي که در حرارت هاي بالا خراب نمي شوند(نمي سوزند) استفاده مي شود. البته وسايلي را که در ساختمان آنها پنبه, کاغذ, و يا پلاستيک بکار رفته باشد نميتوان با حرارت خشک ضدعفوني نمود. تيغ و چاقوهاي جراحي و اسکالپل ها نيز نبايد با اين روش استريليزه شوند, زيرا حرارت هاي بالا موجب کند شدن لبه برنده اين وسايل ميشود. اگرچه در ضدعفوني کردن وسايل با حرارت توصيه ميشود که از آون هاي آزمايشگاهي استفاده شود,ولي مي توان از کوره (فر) اجاق گاز و يا اجاق برقي خانگي نيز بهمين منظور استفاده نمود.

استريليزاسيون با آون شامل سه مرحله مهم مي باشد :

• مرحله اول شامل زمان لازم براي گرم شدن کوره مي باشد. براي گرم شدن کوره و رسيدن دماي محتويات آن به دماي استريليزاسيون در همه قسمت ها مدت تقريبا يکساعت مورد نياز است.
• مرحله دوم عبارت است از زمان لازم براي استريليزاسيون. زمان لازم براي استريليزاسيون بر حسب دماي کوره متغير است و عبارت است از 45 دقيقه در 160 درجه سانتيگراد, 18 دقيقه در 170 درجه سانتيگراد, 5/7 دقيقه در 180 درجه  سانتيگراد, و 5/1 دقيقه در 190 درجه  سانتيگراد .اگر دماي کوره حرارتي در يک درجه متعادل مثلا در 160 درجه سانتيگراد تنظيم شده باشد زمان لازم براي اجراي استريليزاسيون (مجموع سه مرحله) تقريبا دو ساعت خواهد بود .
• مرحله سوم عبارت است از زمان لازم براي خنک شدن کوره مي باشد.

توصيه مي شود که بمنظور جلوگيري از ترک برداشتن ظروف شيشه اي, در اثر کاهش ناگهاني درجه حرارت, پس از اتمام استريليزاسيون و قبل از بيرون آوردن ظروف از داخل کوره مدتي هم براي خنک شدن آنها اختصاص داده شود. قبل از قرار داده شدن وسايلي که قرار است در کوره حرارتي استريليزه شوند بايد آنها به دقت با ورق آلومينيومي مقاوم پيچيده شوند. در کشور امريکا سه نوع ورق آلومينيومي بصورت تجاري عرضه مي شوند که عبارتند از : ورق آلومينيومي نازک, مقاوم, و خيلي مقاوم. در تحقيقات مربوط به کشت بافت هاي گياهي هميشه از نوع مقاوم استفاده ميشود, زيرا در نوع نازک اکثرا سوراخهاي بسيار ريزي وجود دارد و نوع خيلي مقاوم نيز براي پيچيدن شيشه آلات بيش از حد ضخيم است. پس از اتمام عمل سترون سازي ابزار استريليزه شده, که هنوز در ورق آلومينيومي پيچيده هستند, به اتاقک کار منتقل ميشوند.

روش حرارت مرطوب ( بخار داغ ) Wet Heat     :

در اين روش از اتوکلاوهايي که قادر به توليد بخار داغ تحت فشار هستند استفاده ميشود . اگر در آزمايشگاه اتوکلاو وجود نداشته باشد ميتوان بجاي آن از يک ديگ بخار و يا ديگ زود پز تحت فشار استفاده نمود. بمنظور استريليزه کردن مواد کاغذي, ظروف شيشه اي, ساير ابزار کار, و ارلن هاي محتوي مايع (بشرطي که در هر ظرف شيشه اي کمتر از 50 سانتيمتر مکعب مايع وجود داشته باشد) فشار بخاري معادل 15 پوند بر اينچ مربع (4/103) در دماي 121 درجه سانتيگراد بمدت 15 دقيقه مورد نياز ميباشد.

پايان نامه زراعت